紫外分光光度法和薄层色谱法证实,胞嘧啶和胞苷在所有ph值下分别脱氨为尿嘧啶和尿苷。这些产品在强碱性溶液中缓慢降解。胞苷在强碱性溶液中也会平行降解为一种非发色性化合物,它可以被指定为嘧啶环裂解的产物。胞嘧啶及其衍生物脱氨的表观一级速率常数的动力学表达式为:k1=(kh2o koh[oh-])fh2c (koh)1[oh-]fhc
其中,fh2c 和fhc分别是底物质子化和非质子化的组分;并制备了几种温度下的logk-ph曲线。获得了脱胺反应的微观速率常数及其阿伦尼乌斯参数。胞嘧啶在高碱性溶液中表现出可分配给解离的pk’a2,并且这种阴离子形式表现出对脱氨的抗性,没有这样的动力学pk’a2可分配给胞苷。得到了乙酸盐和碳酸盐盐两种缓冲剂的脱胺缓冲催化常数。
这种对胞嘧啶和胞苷的化学转化的定量研究是一系列吡啶嘧啶和嘌呤核苷及其衍生物溶解度反应研究的延续。本文报道了胞嘧啶和胞苷溶解度降解的动力学和可能的机理,以及相关热力学参数的确定。schuster和schramm发现,核酸中胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤残基的脱氨基作用可能受到亚硝酸的影响。jordan实验表明,在强酸性条件下,胞嘧啶和鸟嘌呤可以脱胺; shapiro和klein报道,胞嘧啶和胞嘧啶也在几个ph值为5的酸性缓冲液中,在非常高的温度下(如95℃)进行脱胺反应,而且这些反应是由几个缓冲液的种类催化的。notari等人提供了关于胞嘧啶及其核苷的缓冲液影响脱氨的定量数据,他们报道了胞嘧啶及胞嘧啶核苷在ph 3.4 ~ 7.7之间的不同缓冲液中脱氨。他们还证明了糖基催化脱胺速率,糖基构型的改变也影响脱胺速率。
胞嘧啶溶解的光谱变化
在动力学研究的ph处获得的光谱和在胞嘧啶的酸化溶液的光谱中发现的等渗点(ph=0.1n naoh)和胞苷(ph=8.2)表明一对一的溶剂化转变。典型例子如图1所示。酸化溶液中的等渗点为263 nm,由于胞嘧啶与其产物尿嘧啶之间以及胞嘧啶与其产物尿苷之间的λ最大值在此溶液中的差值最大,这些产物在酸性溶液中也是高度稳定的,因此优选使用酸化溶液来估算速率常数。
图1-在酸性大于0.1n naoh的溶液中反应m胞嘧啶的酸化溶液的典型紫外光谱变化,其中反应的唯一产物是尿嘧啶,如263 nm处等渗点的保持所示。这些光谱用于在0.01n hci中80.0°的反应,并标记为反应的天数
反应凯发k8娱乐-凯发k8一触即发的酸化溶液的光谱变化对于所有酸性大于0.1nnaoh的溶液遵循相同的模式:λ最大值从胞嘧啶(274 nm)发生减色移位。对尿嘧啶(259 nm)类似地,在ph8.2之前,胞苷酸化溶液的光谱变化具有相同的模式:λ最大变色从胞苷(280 nm)到尿苷(262 nm)。溶剂化过程可以说涉及胞嘧啶脱氨化为尿嘧啶,直到0.1n氢氧化钠溶液的ph和0.1n氢氧化钠溶液的ph值。溶剂化过程包括胞嘧啶脱氨化为尿嘧啶,直到0.1n氢氧化钠溶液的ph和0.1n氢氧化钠溶液的ph值。溶剂化过程包括胞嘧啶脱氨化为尿嘧啶。胞苷到尿苷最高ph为8.2。这些转化以前被证明在ph6以下存在。
图2-碱性反应m胞嘧啶酸化溶液的典型紫外光谱变化。这些光谱用于在85.0°的0.2n naoh中进行反应,并标记为cis到反应的天数。缺乏等渗点的维持表明了对脱氨反应的平行和或顺序反应。
在高碱性区域,基于原位光谱研究和酸化溶液的动力学研究确实显示了λ最大值从胞嘧啶向尿嘧啶或frcm的转变,从胞苷到尿苷。然而,这些光谱变换中缺少等渗点表明溶剂化降解序列更为复杂。在这些碱性区域中反应的酸化溶液的典型光谱变化在图2和图3中作为时间的函数给出。λ最大值的移动伴随着吸光度的损失,这表明尿嘧啶和尿苷进一步降解为非发色团和尿嘧啶核苷。图2和图3给出了酸化溶液的典型光谱变化。图2和图3给出了酸化溶液的典型光谱变化作为时间的函数。最大吸光度的偏移伴随着吸光度的损失,尿嘧啶和尿嘧啶进一步降解为非发色团和/。或者,胞嘧啶和胞苷除了各自脱氨为尿嘧啶和尿苷外,还直接降解为非发色性化合物。
图3-碱性反应10-4m胞苷酸化溶液的典型紫外光谱变化。这些光谱用于在85.0°的0.2n naoh中进行反应,并标记为反应的天数。缺乏等渗点的维持是对脱氨反应的平行和/或顺序反应的指示
胞嘧啶溶解度的tlc研究
tlc研究表明,在0.25 n naoh中,在90°时,胞嘧啶(rf 0.44)降解为与尿嘧啶具有相同rj值(0.62)的发色化合物。这种化合物的量最初增加,然后缓慢减少,直到完全消失。类似地,胞苷(rf 0.52)降解为具有与尿苷相同的rf值(0.64)的发色化合物,并且该化合物进一步降解为非发色化合物。进一步证明中间体是尿嘧啶和尿苷,通过从制备厚层板中用水洗脱中间体获得。将溶液离心;溶液中间体的紫外光谱在不同ph值下读取,与尿嘧啶和尿苷的紫外光谱相同。在碘室中胞嘧啶和尿嘧啶的tlc斑点可见,而胞苷抗尿嘧啶的斑点则不可见。在碱性溶液中胞苷的降解过程中没有出现这些斑点的事实表明,胞苷降解为尿苷,并且这些化合物中的一个或两个进一步降解为除尿嘧啶之外的非发色性化合物。
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